附录二寄生虫病实验诊断技术11粪

扁豆的对人体健康的好处你了解多少呢 http://www.zgbdf.net/baidianfeng/baidianfengshebei/m/27125.shtml
附录二寄生虫病实验诊断技术第一节病原学诊断技术一、粪便检查粪便检查是诊断寄生虫病的基本方法。为了取得准确的结果，送检标本需保持新鲜，保存时间一般不宜超过24小时。如检查肠内原虫滋养体，最好立即检查，或暂时保存在35～37℃条件下待查。盛粪便的容器要干净，粪便中不可混入尿液和其他污染物，以免影响检查结果。具体方法如下：（一）直接涂片法（directsmearmethod）用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。方法简便，连续作3次涂片，可以提高检出率。1.蠕虫卵检查滴1滴生理盐水于洁净的载玻片上，用牙签挑取绿豆大小的粪便块，在生理盐水中涂抹均匀；涂片的厚度以透过玻片约可辨认书上的字迹为宜。一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。虫卵都具有一定形状和大小，卵壳大多表面光滑整齐，具固有的色泽，卵内含卵细胞或幼虫。2.原虫检查（1）滋养体检查：涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。气温愈接近体温，滋养体的活动愈明显。必要时可用保温台保持温度。（2）包囊的碘液染色检查：直接涂片方法同上，以1滴碘液代替生理盐水，粪便涂抹方法同上。若同时检查活滋养体，可在玻片另一侧滴1滴生理盐水。同上法涂抹粪便标本，再盖上盖片。片中滴碘液的一侧查包囊；另一侧查活滋养体。碘液配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水ml。（3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前最佳的方法为金胺-酚改良抗酸染色法。其次为金胺-酚染色法和改良抗酸染色法。对于新鲜粪便或经10%福尔马林固定保存（4℃1个月内）的含卵囊粪便都可用这三种方法染色。染色过程是先用金胺-酚染色，再用改良抗酸染色法复染。方法步骤如下：金胺-酚（auraminephenol）染色法：1）染液配制：1g/L金胺-酚染色液（第一液），金胺0.1g，石炭酸5.0g，蒸馏水ml；3%盐酸酒精（第二液），盐酸3ml，95%酒精ml；5g/L高锰酸钾液（第三液），高锰酸钾0.5g，蒸馏水ml。2）染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，10～15分钟后水洗；滴加第二液，1分钟后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置荧光显微镜下检查。低倍荧光镜下，可见卵囊为一圆形小亮点，发出乳白色荧光。高倍镜下卵囊呈乳白或略带绿色，卵囊壁为一薄层，多数卵囊周围深染，中央淡染，呈环状，核深染结构偏位，有些卵囊全部为深染。但有些标本可出现非特异性荧光颗粒，应注意鉴别。改良抗酸（modifiedacid-fast）染色法：1）染色液配制：石炭酸复红染色液（第一液），碱性复红4g，95%酒精20ml，石炭酸8ml，蒸馏水ml；10%硫酸溶液（第二液），纯硫酸10ml，蒸馏水90ml（边搅拌边将硫酸徐徐倾入水中）；20g/L孔雀绿液（第三液），20g/L孔雀绿原液1ml，蒸馏水10ml。2）染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，1.5～10分钟后水洗；滴加第二液，1～10分钟后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置显微镜下观察。染色后，卵囊呈玫瑰红色，圆形或椭圆形，背景为绿色。如染色（1.5分钟）和脱色（2分钟）时间短，卵囊内子孢子边界不明显；如染色时间长（5～10分钟）脱色时间需相应延长，子孢子边界明显。卵囊内子孢子均染为玫瑰红色，子孢子呈月牙形，共4个。其他非特异颗粒则染成蓝黑色，容易与卵囊区分。不具备荧光显微镜的实验室，亦可用本方法先染色，然后在光镜下过筛检查。如发现小红点再用油镜观察以提高检出速度和准确性。金胺-酚染色-改良抗酸复染法：本法可克服上述染色法的缺点。具体方法是：先用金胺酚染色后，再用改良抗酸染色法复染。光学显微镜下观察，卵囊同抗酸染色法所见，但非特异性颗粒被染成蓝黑色，两者颜色截然不同，极易鉴别，使检出率和准确性大大提高。（二）厚涂片透明法（改良加藤法）（modifiedKato’sthicksmear）取约50mg（已用目不锈钢筛除去粪渣）粪便，置于载玻片上，覆以浸透甘油—孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便铺开（20mm×25mm）。置于30～36℃温箱中约半小时或25℃约1小时。待粪膜稍干，即可镜检。玻璃纸准备将玻璃纸剪成22mm×30mm大小的小片，浸于甘油—孔雀绿溶液（含纯甘油ml、水ml和1ml3%孔雀绿水溶液）中至少浸泡24小时，至玻璃纸呈现绿色。使用此法需掌握粪膜的合适厚度和透明的时间，如粪膜厚且透明时间短，虫卵难以发现；如透明时间过长则虫卵变形，不易辨认。（三）浓聚法（concentrationmethod）1.沉淀法（sedimentationmethod）原虫包囊和蠕虫卵的比重大，可沉积于水底，有助于提高检出率。但比重较小的钩虫卵和某些原虫包囊则效果较差。（1）重力沉淀法：即自然沉淀法。本法主要用于蠕虫卵检查，蠕虫卵比重大于水，可沉于水底，使虫卵浓集。经水洗后，视野清晰，易于检查。取粪便20～30g、加水制成混悬液，用金属筛（40～60孔）或2～3层湿纱布过滤，再加清水冲洗残渣；过滤后的粪液在容器中静置25分钟，倒去上层液，重新加满清水，以后每隔15～20分钟换水1次（共3～4次），直至上层液清晰为止。最后倒去上层液，取沉渣作涂片镜检。如检查包囊，换水间隔时间宜延长至约6小时（附图1）。附图1粪便自然沉淀法及毛蚴孵化法（2）离心沉淀法（centrifugesedimentation）：将上述滤去粗渣的粪液离心（～rpm）1～2分钟，倒去上层液，注入清水，再离心沉淀，如此反复沉淀3～4次，直至上层液澄清为止，最后倒去上层液，取沉渣镜检。本法省时、省力，适用于临床检验。（3）汞碘醛离心沉淀法（merthiolate-iodine-formaldehydecentrifugationsedimentationmethod,MIFC）：本法既可浓集，又可固定和染色，适用于原虫包囊、滋养体及蠕虫卵和幼虫的检查。如准确称取1g粪便，即可作蠕虫卵的定量检查。取粪便1g，加适量（约10ml）汞碘醛液，充分调匀，用2层脱脂纱布过滤，再加入乙醚4ml，摇2分钟，离心（rpm）1～2分钟，即分成乙醚、粪渣、汞碘醛及沉淀物4层。吸弃上面3层，取沉渣镜检。汞碘醛配制：1）汞醛（MF）液：1/0硫柳汞酊ml，甲醛（40%）25ml，甘油50ml，蒸馏水ml。2）卢戈氏液：碘5g，碘化钾10g，蒸馏水ml。检查时取汞醛液2.35ml及5%卢戈氏液0.15ml混合备用。但混合液保存8小时后即变质，不宜再用；碘液亦不宜于1周后再用。（4）醛醚沉淀法（formalin-ethersedimentation）：取粪便1～2g置于小容器内，加水10～20ml调匀，将粪便混悬液经2层纱布（或目金属筛网）过滤，离心（rpm）2分钟；倒去上层粪液，保留沉渣，加水10ml混匀，离心2分钟；倒去上层液，加10%甲醛7ml。5分钟后加乙醚3ml，塞紧管口并充分摇匀，取下管口塞，离心2分钟；即可见管内自上而下分为4层。取管底沉渣涂片镜检。本法不仅浓集效果好，而且不损伤包囊和虫卵的形态，易于观察和鉴定。对于含脂肪较多的粪便，本法效果优于硫酸锌浮聚法。但对布氏嗜碘阿米巴包囊、贾第虫包囊及微小膜壳绦虫卵等的检查效果较差。2.浮聚法（flotationmethod）利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮，集中于液体表面。常用的方法有：（1）饱和盐水浮聚法（brineflotation）：此法用以检查钩虫卵效果最好，也可用于检查其他线虫卵和微小膜壳绦虫卵。但不适于检查吸虫卵和原虫包囊。用竹签取黄豆粒大小的粪便置于浮聚瓶（高3.5cm，直径约2cm的圆形直筒瓶）中，加入少量饱和盐水调匀，再慢慢加入饱和盐水至液面略高于瓶口，以不溢出为止。此时在瓶口覆盖一载玻片，静置15分钟后，将载玻片提起并迅速翻转，镜检（图2）。附图2饱和盐水浮聚法饱和盐水配制：将食盐徐徐加入盛有沸水的容器内，不断搅动，直至食盐不再溶解为止。（2）硫酸锌离心浮聚法（zincsulfatecentrifugeflotation）：此法适用于检查原虫包囊、球虫卵囊、线虫卵和微小膜壳绦虫卵。取粪便约1g，加10～15倍的水，充分搅碎，按离心沉淀法过滤，反复离心3～4次，至水清为止，最后倒去上清液，在沉渣中加入比重为1.18的硫酸锌液（33%的溶液），调匀后再加硫酸锌溶液至距管口约1cm处，离心1分钟。用金属环粘取表面的粪液置于载玻片上，加碘液1滴（查包囊），镜检。取标本时，用金属环轻轻接触液面即可，切勿搅动。离心后应立即取标本镜检，若放置时间超过1小时，会因包囊或虫卵变形而影响观察效果。（3）蔗糖溶液离心浮聚法（flotationmethodwithsucrosesolution）：此法适用于检查粪便中隐孢子虫的卵囊。取粪便约5g，加水15～20ml，以目尼龙袋或4层纱布过滤。取滤液离心5～10分钟，吸弃上清液，加蔗糖溶液（蔗糖g，蒸馏水ml，石炭酸6.5ml）再离心，然后如同饱和盐水浮聚法，取其表面液镜检（高倍或油镜）。卵囊透明无色，囊壁光滑，内含一小暗点和呈蛋黄色的子孢子。隐孢子虫的卵囊在漂浮液中浮力较大，常紧贴于盖片之下，鉴于1小时后卵囊脱水变形不易辨认，故应立即镜检。也可用饱和硫酸锌溶液或饱和盐水替代蔗糖溶液。常见蠕虫卵、原虫包囊的比重见附表1。附表1蠕虫卵、原虫包囊的比重（四）毛蚴孵化法（miracidiumhatchingmethod）依据血吸虫卵内的毛蚴在适宜温度的清水中，短时间内可孵出的特性而设计的方法。取粪便约30g，先经重力沉淀法浓集处理，再将粪便沉渣倒入三角烧瓶内，加清水（城市中须用去氯自来水）至瓶口，在20～30℃的条件下，经4～6小时后用肉眼或放大镜观察结果。如见水面下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。必要时也可以用吸管将毛蚴吸出镜检。如无毛蚴，每隔4～6小时（24小时内）观察1次。气温高时，毛蚴可在短时间内孵出，因此在夏季要用1.2％食盐水或冰水冲洗粪便，最后1次才改用室温清水（图1）。毛蚴促孵法：将用沉淀法处理后的粪便沉渣置于三角瓶内，不加水，或将粪便置于吸水纸上，再放在20～30℃温箱中过夜。检查前再加清水，2小时后就可见到孵出的毛蚴。采用此法，毛蚴孵出时间较一致，数量也较多。（五）肛门拭子法（analswab）适用于检查肛周产卵的蛲虫或常可在肛门附近发现的带绦虫卵。1.棉签拭子法先将棉签浸泡在生理盐水中，取出时挤去过多的盐水，在肛门周围擦拭，随后将棉签放入盛有饱和盐水的试管中，用力搅动，迅速提起棉签，在试管内壁挤干水分后弃去，再加饱和盐水至管口处，覆盖一载玻片，务使其接触液面，5分钟后取下载玻片镜检。也可将擦拭肛门的棉签放在盛清水的试管中，经充分浸泡，取出，在试管内壁挤去水分后弃去。试管静置10分钟，或经离心后倒去上层液，取沉渣镜检。2.透明胶纸法（cellophanetape）用长约6cm，宽约2cm的透明胶纸有胶面，粘贴肛门周围的皮肤，然后将有胶的一面平贴在玻片上，镜检。（六）钩蚴培养法（culturemethodforhookwormlarvae）根据钩虫卵内幼虫在适宜条件下可在短时间内孵出的原理而设计的方法。加冷开水约1ml于洁净试管内（1×10cm），将滤纸剪成与试管等宽但较试管稍长的“Ｔ”字形纸条，用铅笔书写受检者姓名或编号于横条部分。取粪便约0.2～0.4g，均匀涂抹在纸条竖部的上2/3处，再将纸条插入试管，下端浸泡在水中，以粪便不接触水面为度。在20～30℃条件下培养。培养期间每天沿管壁补充冷开水，以保持水面高度。3天后用肉眼或放大镜检查试管底部。钩蚴在水中常作蛇行游动，虫体透明。如未发现钩蚴，应继续培养观察至第5天。气温太低时可将培养管放入温水（30℃左右）中数分钟后，再行检查（附图3）。附图3钩蚴培养法此法亦可用于分离人体肠道内各种阿米巴滋养体及人毛滴虫滋养体，且能提高检出率。但每管粪便量应为1.0g，适宜温度为25～30℃，培养时间为2～4天。临床上为了及时报告致病原虫，可于培养48小时后镜检。（七）定量透明法适用于各种粪便内蠕虫卵的检查及计数。此法系应用改良聚苯乙烯作定量板（图4），大小为40mm×30mm×1.37mm，模孔为一长圆图5定量板孔，大小为8mm×4mm，两端呈半圆形，所取的粪样平均为41.7mg。操作时将大小约4cm×4cm的目尼龙网或金属筛网覆盖在粪便标本上，自筛网上用刮片刮取粪便，置定量板与载玻片上，用两指压住定量板的两端，将刮片上的粪便填满模孔，刮去多余粪便。掀起定量板，载玻片上留下一长形粪条，然后在粪条上覆盖含甘油-孔雀绿溶液的玻璃纸条，展平后加压，使玻璃纸下的粪便铺成长椭圆形。经1～2小时透明后置镜下计数。将所得虫卵数×24，再乘上述粪便性状系数，即为每克粪便虫卵数（eggspergram，EPG）。图4定量板（八）淘虫检查法为了考核驱虫效果，常需从粪便中淘取驱除的虫体进行鉴定与计数。取患者服药后24～72小时的全部粪便，加水搅拌，用筛（40目）或纱布滤出粪渣，经水反复冲洗后，倒在盛有清水的大型玻皿内。检查混杂在粪渣中的虫体时，应在玻皿下衬以黑纸。（九）带绦虫孕节检查法绦虫节片用清水洗净，置于两张玻片之间，轻轻压平，对光观察内部结构，并根据子宫分支情况鉴定虫种。也可用注射器从孕节后端正中部插入子宫内徐徐注射碳素墨水或卡红，待子宫分支显现后计数。卡红染液配制：钾明矾饱和液ml，卡红3g，冰醋酸10ml。混合液置于37℃温箱内过夜，过滤后即可应用。各种蠕虫每条雌虫每日排卵数见表2。附表2各种蠕虫每条雌虫每日排卵数（诸欣平卢思奇）(文献资料源自全国高等学校教材《人体寄生虫学》第七版，李雍龙主编，7年人民卫生出版社。)

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目录

第一篇总论第一章引言第一节寄生虫对人类的危害第二节我国寄生虫病的现状及存在的问题第三节正在出现的寄生虫病第四节寄生虫学的研究与发展方向

第二章寄生虫的生物学

第一节寄生关系及其演化第二节寄生虫生活史、寄生虫与宿主类型第三节寄生虫的营养与代谢第四节寄生虫的生殖潜能第五节寄生虫的分类系统

第三章寄生虫与宿主的相互关系及寄生虫感染的特点

第四章寄生虫感染的免疫

第五章寄生虫病的流行与防制

第一节寄生虫病流行的环节

第二节影响寄生虫病流行的因素

第三节寄生虫病流行的特点

第四节寄生虫病的防治原则

第二篇医学原虫学

第六章医学原虫概论

第七章叶足虫

第一节溶组织内阿米巴

第二节其他消化道阿米巴

一、迪斯帕内阿米巴

二、结肠内阿米巴三、哈门氏内阿米巴四、微小内蜒阿米巴五、布氏嗜碘阿米巴六、齿龈内阿米巴

第三节致病性自由生活阿米巴

第八章鞭毛虫

第一节杜氏利什曼原虫

第二节锥虫

第三节蓝氏贾第鞭毛虫

第四节阴道毛滴虫

第五节其他毛滴虫

一、人毛滴虫

二、口腔毛滴虫

第九章孢子虫

第一节疟原虫

第二节刚地弓形虫

第三节隐孢子虫

第四节其他孢子虫

一、肉孢子虫二、贝氏等孢球虫三、微孢子虫四、人芽囊原虫

第十章纤毛虫

结肠小袋纤毛虫

第三篇医学蠕虫学

第十一章吸虫

第一节概论

第二节华支睾吸虫

第三节布氏姜片吸虫

第四节肝片形吸虫

第五节并殖吸虫

第六节裂体吸虫（血吸虫）

第七节其他人体寄生吸虫

一、异形吸虫

二、棘口吸虫三、徐氏拟裸茎吸虫

第十二章绦虫

第一节概论

第二节曼氏迭宫绦虫

第三节阔节裂头绦虫

第四节链状带绦虫

第五节肥胖带绦虫

第六节亚洲牛带绦虫

第七节微小膜壳绦虫

第八节缩小膜壳绦虫

第九节细粒棘球绦虫

第十节多房棘球绦虫

第十一节犬复孔绦虫

第十二节其他人体寄生绦虫

一、西里伯瑞列绦虫二、克氏假裸头绦虫三、司氏伯特绦虫四、巨颈带绦虫和水泡带绦虫

第十三章线虫

第一节概论

第二节似蚓蛔线虫

第三节毛首鞭形线虫

第四节蠕形住肠线虫

第五节十二指肠钩口线虫和美洲板口线虫

第六节粪类圆线虫

第七节旋毛形线虫

第八节丝虫

一、班氏吴策线虫和马来布鲁线虫二、旋盘尾丝虫三、罗阿罗阿丝虫

第九节广州管圆线虫

第十节其他寄生人体的线虫(1-5)

一、东方毛圆线虫二、美丽筒线虫三、结膜吸吮线虫四、棘颚口线虫五、艾氏小杆线虫第十节其他寄生人体的线虫(6-10)

六、兽比翼线虫

七、麦地那龙线虫

八、肾膨结线虫

九、肝毛细线虫

十、异尖线虫

第十四章猪巨吻棘头虫

附录水蛭

第四篇医学节肢动物

第十五章概论

第一节节肢动物的主要类群第二节医学节肢动物对人体的危害第三节医学节肢动物的防制第十六章昆虫纲概述第一节蚊

第二节白蛉

第三节蠓

第四节蚋

第五节虻

第六节蝇

第七节蚤

第八节虱

第九节臭虫

第十节蜚蠊

第十一节毒隐翅虫

第十七章蛛形纲

引言

第一节蜱

第二节革螨

第三节恙螨

第四节蠕形螨

第五节疥螨

第六节尘螨

附录一

突发公共卫生事件中寄生虫感染的应急处理

本篇章相关资料

影音详解直接涂片法、钩蚴培养法和饱和盐水漂浮法三种诊断技术的原理和操作。

图文影音详解自然沉淀法、离心沉淀法和尼龙筛集卵法三种诊断技术的原理和操作。

影音详解血吸虫毛蚴孵化法的原理及操作

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